La capilla número 27 es la de «Sta. Mª Magdalena y Asunción de Nta. Señora» fundada en el año 1554 por el magistrado don Pedro Fernández de Valenzuela, magistrado cordobés que ocupó altos cargos jurídicos y académicos en el Virreinato del Perú, siendo el primer rector laico de la Universidad de Lima
En la reja, forjada por el herrero Fernando de Valencia, se pueden ver dos carteles con la fecha 1554. Los finos barrotes de la parte baja terminan en un friso con temas platerescos, sobre el cual se desarrolla el segundo cuerpo, más decorado, con un medio punto en cuyo interior dos figuras sostienen el escudo de la familia Valenzuela.
En el interior se instala un retablo renacentista de tres calles, diseño de Hernán Ruiz II, la central es más ancha y en ella se sitúan dos grupos escultóricos, Nuestra Señora de la Asunción rodeada de ángeles y sobre ella, en el segundo cuerpo, un Jesús Crucificado.
En los intercolumnios se instalan pinturas que representan, en el banco, la “Adoración de los Pastores”, “la Epifanía” y “La Estigmatización de San Francisco de Asís”; en el primer cuerpo, vemos a San Juan Evangelista y a Santa Catalina en el segundo cuerpo las pinturas representan a Santiago y San Sebastián; y en el ático, hay imágenes de la Virgen, de la Santísima Trinidad y del Arcángel San Gabriel en la Anunciación.
El frontal de azulejos del altar está datado del año 1558; en él se representa la escena bíblica del Maná
