Entre la de Santa Inés y el gran arco de separación entre las ampliaciones de Al-Hakan II y la de Almanzor, se encuentra el espacio de una capilla desmontada, perteneció a la capilla de San Antolín, la cual fue refundada en el siglo XV, dedicándosela a San Antonino, como aparece en el plano de la Mezquita de 1741. De esta capilla tan solo quedan los tres escudos sobre el que era el arco de ingreso.
La bóveda de nervios gótica fue realizada en 1520 por Hernán Ruiz I.
Aquí fue trasladado un altar de la capilla de la Encarnación, sobre una mesa de azulejos mudéjares del siglo XV, se expone uno de los mejores cuadros del templo, una Anunciación realizada por Pedro de Córdoba en el siglo XV.
En ella se representa a los donantes, a la izquierda Diego Sánchez de Castro, a su lado su santo homónimo, Santiago (el nombre de Diego procede de Sant Iago) y San Ivo de Bretaña y Santa Bárbara. Fente a ellos el canónigo Juan Muñoz, a su lado San Juan, San Lorenzo y San Pío. Entre los donantes se encuentra la firma del pintor.
Por encima de los ocho personajes se representa el momento de la Anunciación, el Arcángel San Gabriel, con un báculo y una cinta con el anuncio, se encuentra separado de María por un jarrón de azucenas, símbolo de la virginidad de María.
En la ventana se representa al Padre Eterno, con capa y corona, en su mano el orbe con la cruz, donde se escribe “Asia” y “África”.
A los pies del cuadro se encuentra una cartela que identifica a los personajes representados y lo fecha el 20 de marzo de 1475.
Los escudos que podemos ver en el arco de la pared que nos separa de la ampliación de Almanzor, pertenecen a Diego Sánchez de Castro, arcediano de Badajoz, acólito y capellán de la Sede Apostólica, fundador de la capilla del siglo XV.
En el muro, entre dos grandes arcos abiertos para conectar las dos ampliaciones de la Mezquita, fue descubierto a finales del siglo XX un fresco realizado en el XIV, donde se representa el Bautismo de Cristo.
Por detrás del altar podemos ver una escalera de madera, de reciente construcción, es el acceso al cuarto de seguridad del edificio, donde se controlan las distintas alarmas.
